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PCR儀被分為以下兩類(lèi)

更新時(shí)間:2022-03-28   點(diǎn)擊次數:1497次
   PCR儀是利用DNA在體外攝氏95°高溫時(shí)變性會(huì )變成單鏈,低溫(經(jīng)常是60°C左右)時(shí)引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合,再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度(72°C左右),DNA聚合酶沿著(zhù)磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。實(shí)際就是一個(gè)溫控設備,能在95℃,55℃,72℃之間很好地進(jìn)行溫度控制。PCR擴增儀又稱(chēng)為PCR基因擴增儀、PCR核酸擴增儀、聚合酶鏈反應核酸擴增儀,是利用PCR(Polymerasechainreaction,聚合酶鏈反應)技術(shù)對特定DNA擴增的一種儀器設備,被廣泛運用于醫學(xué)、生物學(xué)實(shí)驗室中,例如用于判斷檢體中是否會(huì )表現某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因復制以及親子鑒定等。
  
  PCR技術(shù)的本質(zhì)是體外核酸擴增,加熱使雙鏈DNA解開(kāi)螺旋,在退火溫度條件下引物同模板DNA雜交,在TaqDNA聚合酶,dNTPs,Mg2+和合適pH緩沖液存在條件下延伸引物,重復“變性→退火→引物延伸”過(guò)程至25~40個(gè)循環(huán),呈指數級擴大待測樣本中的核酸拷貝數。
  
  PCR分類(lèi):
  1、普通型
  一次PCR擴增只能運行一個(gè)特定退火溫度的PCR儀。
  用途:主要是做一些簡(jiǎn)單的、對單一退火溫度的目的基因進(jìn)行擴增。
 ?。?)梯度:一次PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度),通常為12種溫度梯度的普通。
  用途:研究未知DNA退火溫度的擴增。
 ?。?)原位PCR:將具有細胞定位能力的原位雜交技術(shù)運用于從細胞內靶DNA的定位分析,在細胞內實(shí)現基因擴增的普通儀器。
  用途:用于在細胞的靶DNA所在位置上進(jìn)行基因擴增。
  
  2、實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀
  PCR擴增時(shí)加入的引物利用熒光素進(jìn)行標記,使引物和熒光探針同時(shí)與模板進(jìn)行特異性結合,擴增結果通過(guò)熒光信號采集系統實(shí)時(shí)采集信號并輸送到計算機分析處理系統,實(shí)時(shí)輸出量化結果。
  熒光定量有單通道,雙通道和多通道之分。當只用一種熒光探針標記的時(shí)候,選用單通道;有多種熒光標記的時(shí)候使用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標記和目的基因表達產(chǎn)物,因為一次只能檢測一種目的基因的擴增量,需多次擴增才能檢測完不同的目的基因片段的量。多通道利于做多重PCR,實(shí)現一次檢測多種目的基因的功能。
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